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如何選擇適合特定分析任務(wù)的高效液相色譜柱?

瀏覽： 839| 更新時(shí)間：2026-03-31 |

一、先定核心：分離模式（第一步選大方向）

1.反相色譜（很常用，占80%常規(guī)分析）

適用：中低極性、弱極性、有機(jī)物、藥物、添加劑、農(nóng)殘、香精、色素、食品添加劑

固定相：C18、C8、C4、苯基

流動(dòng)相：甲醇/乙腈+水（加酸/緩沖鹽）

??絕大多數(shù)常規(guī)檢測(cè)：優(yōu)先C18

2.親水色譜HILIC

適用：強(qiáng)極性物質(zhì)、糖類(lèi)、氨基酸、維生素、小分子親水雜質(zhì)、難保留反相不掛柱

固定相：氨基、硅膠、酰胺、zwitterion兩性柱

??反相不出峰/死時(shí)間出峰→換HILIC

3.正相色譜

適用：異構(gòu)體、手性前體、油脂、烴類(lèi)、非極性同分異構(gòu)體

固定相：純硅膠、氧化鋁

流動(dòng)相：正己烷/異丙醇等有機(jī)溶劑

4.離子交換色譜

適用：有機(jī)酸、無(wú)機(jī)陰陽(yáng)離子、糖酸、水溶性離子化合物

固定相：陰離子/陽(yáng)離子交換樹(shù)脂

5.凝膠滲透GPC/體積排阻SEC

適用：高分子、蛋白、多糖、分子量分布測(cè)定

二、反相C18細(xì)選（日常90%任務(wù)看這里）

1.碳載量/封端與否

普通C18（封端）：中性、弱極性樣品，峰形好，硅羥基吸附小

高碳載C18：保留強(qiáng)，適合弱極性、難洗脫雜質(zhì)

未封端C18/極性嵌入C18：適合含堿性基團(tuán)、易拖尾樣品

2.粒徑（決定柱效+壓力）

5μm：常規(guī)檢測(cè)、國(guó)標(biāo)通用、壓力低、耐用（常規(guī)實(shí)驗(yàn)室的選擇）

3μm：柱效更高，適合復(fù)雜組分分離

1.7/2μm（UPLC超高效）：快速分析、高難度分離，需耐壓儀器

3.孔徑

100Å：小分子（藥物、農(nóng)殘、添加劑）通用

300Å：多肽、蛋白、大分子

糖類(lèi)/聚合物選更大孔徑

4.柱長(zhǎng)短搭配

150mm：常規(guī)快速分析

250mm：難分離、異構(gòu)體、雜質(zhì)多、國(guó)標(biāo)經(jīng)典柱

50–100mm：UPLC快速篩查

三、按「分析任務(wù)」直接匹配（拿來(lái)即用）

①食品添加劑、防腐劑、甜味劑

→C184.6×250mm5μm封端

（苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、甜蜜素、安賽蜜）

②農(nóng)殘、獸藥殘留、激素類(lèi)

→高純硅膠C18/苯基柱（抗基質(zhì)干擾，雜質(zhì)分離干凈）

③維生素、水溶性強(qiáng)極性小分子

→反相保留差→HILIC氨基柱/酰胺柱

④糖類(lèi)、糖醇、淀粉水解物

→氨基柱（HILIC）or鈣型離子排阻柱

⑤有機(jī)酸（檸檬酸、蘋(píng)果酸、乳酸）

→離子交換柱/有機(jī)酸專(zhuān)用分析柱

⑥蛋白、酶、多肽

→300Å孔徑C18或SEC凝膠柱

⑦異構(gòu)體、芳香族同分物

→苯基柱、PFP五氟苯基柱（選擇性強(qiáng)）

四、關(guān)鍵避坑（選錯(cuò)直接拖尾、不出峰、分不開(kāi)）

強(qiáng)極性小分子硬用C18→死時(shí)間出峰，完全不保留

堿性化合物用普通未封端C18→嚴(yán)重拖尾、峰畸形

高鹽緩沖液長(zhǎng)期走純硅膠柱→柱床塌陷

UPLC方法直接換5μm常規(guī)柱→分離度崩盤(pán)、峰擠堆

糖類(lèi)用C18→完全沒(méi)保留

上一條：如何維護(hù)和保養(yǎng)高效液相色譜柱?

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